灵芝孢子粉对荷VX2乳腺癌兔生存期和远处转移的影响
时间:2020.09.04    来源:中国现代药物应用    作者:彭玉娜 谭获 欧阳铭 钟志强

灵芝被公认为扶正固本,滋补强身作用的传统中药。灵芝孢子粉是灵芝的精华,其有效成分远远超过了灵芝。孢子是灵芝发育后期弹射出来的种子,破壁灵芝孢子粉有助于吸收;其主要成分有多糖、腺嘌呤、核苷、有机锗、三蓝类、麦角甾醇、维生素、胡萝卜素及微量元素等。大量的研究表明灵芝孢子粉具有抗肿瘤和增强免疫功能作用,但灵芝孢子粉治疗动物移植肿瘤的实验,国内所使用的实验动物都是小鼠、大鼠等小动物,小动物不能在同一动物上多次采样且采血量小,不能很好地、系统地观察到灵芝孢子粉的药效和不良反应。为进一步更好地研究破壁灵芝孢子粉对恶性肿瘤作用,作者选用大动物一新西兰兔,这方面的实验在国内还未见报道。作者观察了灵芝孢子粉对荷VX2乳腺癌兔生存期和远处转移的影响,现报告如下。

 

1  材料与方法

 

1.1  对象  2.0~2.3kg(10~12周龄)普通级新西兰兔,由广州中医药大学实验动物中心提供及分笼饲养,合格证号为0020557号。

 

1.2  药品  破壁灵芝孢子粉由香港HOLISTOL有限公司提供。

 

1.3  瘤株  VX2瘤株传种兔由南方医院惠桥楼罗支农教授惠赠。


1.4  方法 按文献[4]要求无菌条件下切取传种兔后腿VX2瘤株实体瘤,生理盐水冲洗后,放置于盛有20 ml RPMI1640液的玻璃皿中,取瘤体边缘生长旺盛的鱼肉样组织,约5 mm ×5mm ×5mm,用眼科剪剪成直径0.5~1mm的组织块,与20ml RPMI 1640液一起抽人20ml注射器内,即制成组织块悬液。于兔胸壁左侧第2乳头的乳垫下,注射组织块悬液1ml。2周后,将接种VX2乳腺癌成功模型兔随机分为灵芝组和对照组,各组10只,雌雄各5只。灵芝组:用破壁灵芝孢子粉2g/(kg·d),即浓度30%破壁灵芝孢子粉悬浊液6.67ml/(kg·d)连续灌胃至死亡或实验结束。0.5%狻甲基纤维素钠的配制∶把1g狻甲基纤维素钠溶于体积为60ml的蒸馏水中,补加水至总体积为200ml的蒸馏水中,保存于室温,配制成0.5%竣甲基纤维素钠。30%破壁灵芝孢子粉悬浊液的配制∶把30g破壁灵芝孢子粉分散于总体积为100ml的0.5%狻甲基纤维素钠中,在液体中所形成的粗分散系统,配成30%破壁灵芝孢子粉悬浊液。对照组∶用0.5%竣甲基纤维素钠6.67ml/(kg·d)连续灌胃至死亡或实验结束(10周时结束实验),动物自然死亡后或结束时处死后,常规解剖兔子的尸体,了解转移种瘤情况,记录动物的生存时间。

 

1.5  统计学处理 统计学处理采用统计学软件包SPSS13.0,结果生存曲线比较用log-rank检验,P<0.05为差异有统计学意义。

 

2 结果

 

2.1  如图1所示  实验结束时(10周),灵芝组60%生存,中位生存期大于70d;而对照组只有20%生存,中位生存期为43d;灵芝组与对照组的Kaplan-Meier生存曲线如图所示,其比较用log-rank检验,P<0.05,为差异有统计学意义。说明灵芝孢子粉能够延长荷VX2乳腺癌兔的生存期。

结论图

2.2  解剖终末(自然死亡或结束时处死)的兔子,自然死亡的兔子解剖都有远处转移;结束时处死的兔子中,除灵芝组有2只兔(20%)无转移(图2)外,余均有远处转移(图3、图4)。即实验结束时灵芝组有20%无转移,而对照组全部(100%)有远处转移。

 

3 讨论


     乳腺癌是一种严重威胁女性健康和生命安全的恶性肿瘤,全世界每年约有一百多万妇女患有乳腺癌,占女性恶性肿瘤的首位。乳腺癌的治疗西医以手术、放疗、化疗、内分泌治疗、免疫治疗等综合治疗为主;其中手术、放疗、化疗等都存在选择性不高的缺点,在杀伤肿瘤细胞同时,也可能损害体内某些类型的正常细胞、组织和器官,治疗中常出现较明显的毒副作用;尤其不适合一般情况差,年龄很大,不愿意手术和放化疗的患者;而随着中西医结合防治肿瘤的研究发展,使中医中药在肿瘤的治疗中发挥了其独特的优势。


   为了探讨灵芝的孢子粉对乳腺癌的影响,作者以新西兰兔荷VX2瘤株为模型进行研究。灵芝组与对照组的生存曲线比较,用log-rank 检验,P<0.05,为差异有统计学意义;也说明应用灵芝孢子粉能够延长带瘤兔生存的时间。同时发现灵芝组转移率较低,对照组转移率较高。正如人们所知道∶兔子的主要死亡原因是远处重要器官的转移,是否有远处转移决定了兔子的生存期。故灵芝组转移率较低,其生存期长;对照组转移率较高,其生存期短。近年来国内外也大量报导3灵芝及灵芝成分对多种移植性动物肿瘤调节机体免疫,延长动物的生存期。匡建民等选择经腹腔接种小鼠肉瘤(S180)的昆明种小鼠,经口灌胃齐鲁灵芝破壁孢子粉5、1.25和0.25g/kg(药/鼠质量)。高、中、低实验组和生理盐水的生存时间分别为(23.5±7.5)、(22.75±4.5)、(20.8±2.2)d和(17±3.6)d,生命延长率分别为38.2%、33.8%和22.4%,能明显延长腹水荷瘤小鼠的生存期。宁安红等观察灵芝多糖对S180、U14腹水型荷瘤小鼠的影响,发现灵芝多糖能够显著延长荷瘤小鼠的生存期,但是灵芝多糖对肿瘤细胞无直接杀伤作用。Sliva等用灵芝孢子处理乳腺癌细 MDA2MB2231和前列腺癌PC23细胞,发现灵芝孢子可以抑制这两种肿瘤细胞的迁移和生长,并探究出灵芝孢子通过抑制肿瘤细胞核内的转录因子AP21和NF 2kB的活化,以及抑制尿激酶型血浆酶原催化剂(uPA)和uPA受体的表达和分泌来抑制肿瘤细胞的迁移,从而达到抗肿瘤的效果。灵芝孢子粉抗肿瘤的机制需要进一步深人研究。多数研究报道认为破壁灵芝孢子粉在体外没有直接的抑制或杀伤肿瘤细胞的作用,然而体内给药却具有良好的抗肿瘤作用。推测破壁灵芝孢子粉其抗肿瘤作用不是直接对肿瘤细胞的杀伤作用和直接作用抑制肿瘤细胞,而是通过调节机体的免疫应答进而提高机体的抗肿瘤效应。从而可能延缓转移和减少远处转移,并提高机体整体对抗肿瘤的能力,且无明显不良反应,故能够延长兔的生存期。本研究结果为临床上灵芝孢子粉治疗肿瘤患者提供了实验依据,同时启发我们,灵芝孢子粉可延长某些带瘤生存患者的生存时间,提高生活质量,使患者从中获益。

 

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